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ELISA試劑盒包被用抗原與抗體概述
點(diǎn)擊次數(shù):760 更新時(shí)間:2023-04-10

一、ELISA試劑盒包被用抗原

  用于包被固相載體的抗原按其來(lái)源不同可分為天然抗原、重組抗原和合成多肽抗原三大類(lèi)。天然抗原可取自動(dòng)物組織、微生物培養(yǎng)物等,須經(jīng)提取純化才能作包被用。如HBsAg可以從攜帶者的血清中提取,一般的細(xì)菌和病毒抗原可以從其培養(yǎng)物中提取,蛋白成份抗原可從富含此抗原的材料中提取等(例如AFP從臍帶血或胎肝中提?。?。重組抗原是抗原基因在質(zhì)粒體中表達(dá)的蛋白質(zhì)抗原,多以大腸桿菌或酵母菌為質(zhì)粒體。重組抗原的優(yōu)點(diǎn)是除工程菌成份外,其他雜質(zhì)少,而且無(wú)傳染性,但純化技術(shù)難度較大。以大腸桿菌為質(zhì)粒體的重組抗原如不能充分除大腸桿菌成份,用于ELISA試劑盒,在反應(yīng)中可出現(xiàn)假陽(yáng)性,因不少受檢者受大腸桿菌感染而在血清中存在抗大腸桿菌抗體。重組抗原的另一特點(diǎn)是能用基因工程制備某些無(wú)法從天然材料中分離的抗原物質(zhì)。例如丙型肝炎病毒(HCV)尚不能培養(yǎng)成功,而且丙肝病人血清中HCV抗原含量極微。目前檢測(cè)抗HCVELISA中所用包被抗原大多為根據(jù)HCV的基因克隆表達(dá)而制備的重組抗原。在傳染病診斷中,不少重組抗原如HBsAg、HBeAg和HIV抗原等均在ELISA中取得應(yīng)用。合成多肽抗原是根據(jù)蛋白質(zhì)抗原分子的某一抗原決定簇的氨基酸序列人工合成的多肽片段。多肽抗原一般只含有一個(gè)抗原決定簇,純度高,特異性也高,但由于分子量太小,往往難于直接吸附于固相上。多肽抗原的包被一般需先使其與無(wú)關(guān)蛋白質(zhì)如牛血清白蛋白質(zhì)(BSA)等偶聯(lián),借助于偶聯(lián)物與固相載體的吸附,間接地結(jié)合到固相載體表面。應(yīng)用多肽抗原的另一注意點(diǎn)為他僅能檢測(cè)與其相應(yīng)的抗體。一種蛋白質(zhì)抗原往往含有多個(gè)不同的能引起抗體產(chǎn)生的決定簇,因此在受檢血清中的其他抗體就不能與該多肽抗原發(fā)生反應(yīng)。另外,某些微生物發(fā)生變異時(shí)往往發(fā)生抗原結(jié)構(gòu)變化,在這種情況下,用個(gè)別多肽抗原進(jìn)行包被可引起其他抗體的漏檢。

二、ELISA試劑盒包被用抗體

  包被固相載體的抗體應(yīng)具有高親和力和高特異性,可取材于抗血清或含單克隆抗體的腹水或培養(yǎng)液。如免疫用抗原中含有雜質(zhì)(即便是極微量的),在抗血清中將出現(xiàn)雜抗體,必須除去(可用吸收法)后才能用于ELISA,以保證試驗(yàn)的特異性??寡宀荒苤苯佑糜诎?,應(yīng)先提取IgG,通常采用硫酸銨鹽析和Sephadex凝膠過(guò)濾法。一般經(jīng)硫酸銨鹽析粗提的IgG已可用于包被,高度純化的IgG性質(zhì)不穩(wěn)定。如需用高親和力的抗體包被以提高試驗(yàn)的敏感性,則可采用親和層析法以除去抗血清中含量較多的非特異性IgG。腹水中單抗的濃度較高,特異性亦較強(qiáng),因此不需要作吸收和親和層析處理,一般可將腹水作適當(dāng)稀釋后直接包被,必要時(shí)也可用純化的IgG。應(yīng)用單抗包被時(shí)應(yīng)注意,一種單抗僅針對(duì)一種抗原決定簇,在某些情況下,用多種單抗混合包被,可取得更好的效果。



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